Uji Metode Diagnostik Olaquindox ELISA Untuk Ayam Babi Bebek 96 Sumur/Kit Sensitivitas 0.2 Ppb

Olaquindox ELISA Test Kit untuk Ayam Babi Bebek 96 Sumur/Kit Sensitivitas 0.2 ppb

1. Prinsip

Test kit ini didasarkan pada enzim immunoassay kompetitif untuk mendeteksi Olaquindox dalam sampel.Antigen kopling sudah dilapisi sebelumnya pada garis-garis sumur mikro.TheOlaquindox dalam sampel dan antigen kopling pra-dilapisi pada garis-garis mikro-well bersaing untuk antibodi anti-Olaquindox.Setelah penambahan enzim konjugat, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel memiliki korelasi negatif dengan Olaquindox di dalamnya.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan konsentrasi Olaquindox selanjutnya diperoleh.

2. Spesifikasi teknis

Sensitivitas: 0,2 ppb
Suhu inkubator: 37
Waktu inkubator: 30 menit ~ 30 menit 15 menit

Batas deteksi:
Daging babi, ayam 0.2 ppb
Hati babi 1 ppb
Umpan 20ppb

Laju reaksi silang:
Olaquindox100%
Karbadoks<7%

Tingkat pemulihan:
Jaringan95%±25%
Umpan70%±20%

3. Komponen

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

1) Peralatan: pembaca pelat mikro (450nm/630nm), homogenizer, osilator, centrifuge, pipet ukur, alat pengering nitrogen dan timbangan (kebalikan sensibilitas 0,01 g), Inkubator.
2) Mikropipettor: saluran tunggal 20 hingga 200µL dan 100 hingga 1000µL dan multi-saluran 30～300µl;
3) Reagen: Asetonitril, N-heksana, Al2O3

5. Sampel pra-perawatan

instruksi
Poin-poin berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan dari segala jenis sampel:
1) Hanya ujung sekali pakai yang dapat digunakan untuk eksperimen dan ujungnya harus diganti bila digunakan untuk menyerap reagen yang berbeda;
2) Sebelum percobaan, setiap alat percobaan harus diperiksa kebersihannya dan bila perlu dibersihkan kembali untuk menghindari kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan sampel
1) Contoh larutan pelarutan kembali: Encerkan2× larutan pelarutan kembali pekat dengan air deionisasi pada 1:1

5.1Tissue (Ayam, babi/hati)
1. Ambil 2±0,05g sampel homogen ke dalam tabung sentrifus 50ml, tambahkan 10mLAsetonitril (tanpa air), kocok dengan baik selama 2 menit. Sentrifugasi pada suhu di atas 4000r/menit pada suhu kamar (20 - 25℃) selama 10 menit.
2. Ambil 5mL supernatan, keringkan dengan nitrogen atau udara pada 56℃.
3. Larutkan residu kering dalam 2mlN-heksana, tambahkan 1mL larutan pelarutan kembali yang diencerkan, aduk rata selama 30 detik, sentrifus pada kecepatan di atas 4000r/menit pada suhu kamar (20-25℃) selama 5 menit.Hapus fase N-heksana lapisan atas.
4. Ambil 50 L untuk analisis.
Lipatan pengenceran sampel: 1

5.2Umpan
1. Timbang 1± 0,05 g sampel yang dihomogenkan ke dalam tabung sentrifus, tambahkan 2gAl2O3 , lalu 5mlAsetonitril, kocok kuat-kuat selama 3 menit, sentrifus di atas 4000r/menit pada 25℃ selama 5 menit;
2. Ambil supernatan 50ul, campur dengan larutan pelarutan kembali 950ul secara merata, ambil cairan lapisan atas 50µL untuk analisis.
Lipatan pengenceran sampel: 100

6. Prosedur ELISA

6.1 Instruksi
1) Bawa semua reagen dan strip sumur mikro ke suhu kamar (20-25℃) sebelum digunakan;
2) Kembalikan semua reagen ke 2-8 segera setelah digunakan;
3) Reproduksibilitas analisis ELISA, sebagian besar, tergantung pada konsistensi pencucian piring.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah poin kunci dalam prosedur ELISA;
4) Untuk inkubasi pada suhu konstan, semua sampel dan reagen harus menghindari paparan cahaya, dan setiap lempeng mikro harus disegel oleh membran penutup.

6.2 Prosedur Operasi
1) Keluarkan semua reagen yang diperlukan dan simpan pada suhu kamar (20-25 ) setidaknya selama 30 menit.Perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok dan dicampur dengan baik sebelum digunakan;
2) Ambil strip microwell dan bingkai pelat yang diinginkan.Pelat mikro yang tidak digunakan harus disegel kembali dan disimpan pada suhu 2-8°C;
3) Persiapan larutan: Encerkan 40 mL 20x buffer pencuci pekat dengan air deionisasi pada 1:19 (1 bagian dari 20x buffer pencuci pekat + 19 bagian air deionisasi), atau siapkan sesuai kebutuhan;
4) Penomoran: Beri nomor sumur mikro sesuai dengan sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dilakukan dalam rangkap dua;merekam posisi mereka;
5) Tambahkan 50 L sampel atau larutan standar ke sumur terpisah, lalu tambahkan 50 L larutan kerja antibodi ke masing-masing sumur.Kocok perlahan agar tercampur rata, tutup microplate dengan cover film, dan inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit;
6) Cuci pelat mikro 4-5 kali dengan buffer pencuci 250 L/sumur;rendam sumur dalam buffer pencuci selama 15-30 detik, dan keringkan dengan kertas penyerap (jika ada gelembung udara yang ditemukan setelah penyadapan, potong dengan ujung pipet bersih) );
7) Tambahkan 100 L Enzyme conjugate ke masing-masing well, kocok dan aduk perlahan, tutup microplate dengan cover film, dan inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit;tuangkan cairan dari sumur, cuci piring mikro dengan buffer pencuci, dan lanjutkan ke langkah 6 ).
8) Pengembangan warna: Tambahkan 50 L larutan Substrat A dan 50 L larutan B ke masing-masing sumur.Kocok perlahan dan campur, dan inkubasi pada suhu 37°C selama 15 menit dalam gelap untuk pengembangan warna;
9) Assay: Tambahkan 50 L stop solution ke setiap sumur.Kocok perlahan agar tercampur.Atur panjang gelombang pembaca pelat mikro ke 450nm untuk menentukan nilai OD.(Disarankan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630nm dalam waktu 5 menit).

7. Hasil penilaian

Ada dua metode untuk menilai hasil;yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan kandungan Olaquindox.

7.1 Penentuan kualitatif
Rentang konsentrasi (ng/mL) dapat diperoleh dari perbandingan nilai OD rata-rata sampel dengan larutan standar.Dengan asumsi nilai OD sampelⅠ adalah 0,3, dan sampelⅡ adalah 1,0, sedangkan solusi standar adalah sebagai berikut: 2,243 untuk 0ppb, 1,816 untuk 0,2ppb, 1,415 untuk0,6ppb,0,74 untuk 1,8ppb, 0,313 untuk 5,4ppb dan 0,155 untuk 16.2ppb, sesuai dengan rentang konsentrasi sampelⅠ5,4 hingga 16.2ppb, dan sampelⅡ adalah 0,6 hingga 1,8ppb.

7.2 Penentuan kuantitatif
Nilai rata-rata nilai absorbansi setara dengan persentase nilai OD rata-rata (B) sampel dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100% , itu adalah,

B—nilai OD rata-rata (sumur ganda) dari sampel atau larutan standar
B0—nilai OD rata-rata dari larutan standar 0 ng/mL
Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritma larutan standar Olaquindox (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan X.Baca konsentrasi sampel yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran yang sesuai, sehingga akhirnya diperoleh konsentrasi Olaquindox dalam sampel.
Menggunakan perangkat lunak analisis profesional dari kit ini akan lebih nyaman untuk analisis yang akurat dan cepat dari sejumlah besar sampel.(Silahkan hubungi kami untuk perangkat lunak ini)

8. Tindakan Pencegahan

1. Suhu kamar di bawah 25 atau suhu reagen dan sampel yang tidak dikembalikan ke suhu kamar (20-25 ) akan menyebabkan nilai OD standar yang lebih rendah
2. Kekeringan pelat mikro dalam proses pencucian akan disertai dengan situasi termasuk kurva standar non-linier dan reproduktifitas yang tidak diinginkan
3. Campur setiap reagen dan campuran reaksi secara merata dan cuci pelat mikro secara menyeluruh, jika tidak, akan ada reproduktifitas yang tidak diinginkan
4. Solusi stop adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak dengan kulit;
5. Masukkan pelat mikro yang tidak digunakan ke dalam kantong penyegel otomatis untuk menyegelnya kembali.Zat standar dan pembentuk warna tidak berwarna peka terhadap cahaya, dan karenanya tidak dapat langsung terkena cahaya
6. Jangan gunakan kit yang melebihi tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit akan menyebabkan perubahan sensitivitas dan nilai OD pendeteksian.Jangan menukar reagen dari kit dengan nomor lot yang berbeda untuk digunakan
7. Buang larutan pewarna dengan warna apapun yang menunjukkan degenerasi larutan ini.Nilai pendeteksian larutan standar 0 kurang dari 0,5 menunjukkan degenerasinya
8. Suhu reaksi optimum adalah 37 , dan suhu yang terlalu tinggi atau terlalu rendah akan mengakibatkan perubahan sensitivitas pendeteksian dan nilai OD.

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

Penyimpanan: simpan pada 2-8 , tidak beku.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di box.
Catatan: Jika paket Vakum microplate memiliki kebocoran, itu masih berlaku untuk digunakan, tidak mempengaruhi hasil tes, santai untuk digunakan.

Q1: Kapan akan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

Q2: Apakah mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifik harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami memiliki sertifikasi ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

Q4: Bagaimana memberikan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan pribadi melalui video, telepon, dll.

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga mengirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.