Amantadine Diagnostic ELISA Kit Untuk Ayam Babi Bebek 96 Sumur/Kit Sensitivitas 0.2 Ppb

Amantadine ELISA Test Kit untuk Ayam Bebek Babi 96 Sumur/Sensitivitas Kit 0,2 ppb

 

1. Prinsip

Test kit ini didasarkan pada immunoassay enzim kompetitif untuk mendeteksi Amantadine.Antigen kopling sudah dilapisi sebelumnya pada garis-garis mikro-sumur.Amantadine dalam sampel dan antigen kopling yang dilapisi sebelumnya pada strip microwell bersaing untuk mendapatkan antibodi anti-Amantadine.Setelah penambahan konjugat enzim, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel berkorelasi negatif dengan Amantadine dalam sampel.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan residu Amantadine selanjutnya diperoleh.

 

2. Spesifikasi teknis

Sensitivitas: 0,2ppb
Suhu inkubator: 25 ℃
Waktu inkubator: 30 menit～15 menit

Batas deteksi:
Ayam, bebek 0,2 ppb

Laju reaksi silang:
Amantadin 100%

Tingkat pemulihan:
Ayam, bebek 90±25%

 

3. Komponen

 

1	Strip sumur mikro	12 strip dengan masing-masing 8 sumur yang dapat dilepas
2	6× larutan standar (masing-masing 1 mL)	0ppb	0,2ppb
		0,8ppb	3.2ppb
		12,8ppb	51,2ppb
3	Konjugasi enzim	7ml	topi merah
4	Solusi kerja antibodi	7ml	topi biru
5	Substrat A	7ml	topi putih
6	SubstratB	7ml	topi hitam
7	Hentikan solusi	7ml	topi kuning
8	Ekstraktan	50ml*2	topi transparan
9	20x buffer pencuci pekat	15ml	topi putih
10	5x larutan larut kembali pekat	10ml	topi putih

 

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

 

1) Peralatan: ELISA Reader (450 nm/630nm), homogenizer, shaker, centrifuge, balance: 0.01g quantity sensitive, perangkat pengering nitrogen, inkubator, pipet ukur, printer

2) Mikropipet: saluran tunggal 20ml ~ 200ml, 100ml ~ 1000ml, multi saluran 30～300 μl

3) Reagen: Asetonitril, n-heksana.

 

5. Contoh pra-perawatan

 

Instruksi (Poin-poin berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan)

1) Hanya tip sekali pakai yang dapat digunakan untuk percobaan dan tip harus diganti saat digunakan untuk menyerap reagen yang berbeda;

2) Sebelum percobaan, setiap peralatan percobaan harus dibersihkan dan bila perlu dibersihkan kembali, untuk menghindari kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

 

Persiapan larutan sebelum pra-perawatan sampel:

1) Contoh larutan ekstrak

6 bagian Asetonitril + 1 bagian Ekstraktan untuk mendapatkan larutan ekstrak contoh siap pakai.

2) Sampel kembali larutan pelarut

Gunakan 1 bagian larutan pelarutan ulang pekat (5X) dan larutkan dengan 4 bagian air deionisasi untuk mendapatkan sampel larutan pelarutan ulang siap pakai.

Persiapan Sampel

 

5.1 Persiapan Sampel ayam, bebek

1) Ambil 3,0 ± 0,05 g sampel jaringan homogen ke dalam tabung centrifuge 50ml;tambahkan 6ml larutan ekstrak sampel, kocok selama 3 menit, centrifuge di atas 4000r/min pada suhu kamar (20 - 25 ℃) selama 5 menit;

2) Ambil 2ml fase organik bening ke dalam wadah kering, tiup hingga kering dengan nitrogen atau udara pada suhu 50~60 ℃;

3) Pertama-tama tambahkan 1ml n-heksana, kemudian tambahkan 0,5ml Larutan pelarutan kembali sampel, campur selama 30 detik, centrifuge di atas 4000r/min pada suhu kamar (20 - 25℃) selama 5 menit, buang lapisan atas n-heksana;

4) Ambil cairan lapisan bawah 50μl untuk diuji

Faktor pengenceran: 0,5

 

6. Prosedur ELISA

 

6.1Petunjuk

1. Bawa reagen ELISA ke suhu kamar (20 - 25 °C) sebelum digunakan.

2. Masukkan reagen ELISA kembali ke 2-8 ℃ segera setelah digunakan

3. Reproduksibilitas ELISA dalam proses analisis sangat bergantung pada konsistensi pelat pencuci, pengoperasian pelat pencuci yang benar adalah titik penentuan program ELISA

4. Dalam semua proses inkubasi suhu konstan, hindari paparan cahaya, tutup pelat mikro dengan membran penutup

 

6. 2 Prosedur pengoperasian

1. Bawa test kit ke suhu ruangan (20-25 ℃) selama minimal 30 menit, perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok secara merata sebelum digunakan;

2. Masukkan strip sumur mikro yang diperlukan ke dalam rangka pelat.Tutup kembali pelat mikro yang tidak terpakai, disimpan pada suhu 2-8 ℃, tidak dibekukan.

3. Persiapan larutan: encerkan 15ml 20x buffer pencuci konsentrat dengan air deionisasi hingga 300ml.

4. Penomoran: penomoran sumur mikro menurut sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dilakukan dalam rangkap dua;mencatat posisi mereka.

5. Tambahkan standar/sampel: Tambahkan 50 µL sampel atau larutan standar ke dalam sumur duplikat terpisah, kemudian tambahkan enzim konjugasi, 50 µL/sumur;kemudian larutan kerja antibodi, 50 µL/wadah.Aduk perlahan dengan mengocok pelat secara manual, tutup pelat mikro dengan membran penutup, inkubasi pada suhu 25 °C selama 30 menit dalam gelap.

6. Cuci microplate: Buka membran penutup dengan hati-hati, tuangkan cairan keluar dari microwell;tambahkan 250 µL/well buffer pencuci encer, cuci penuh selama 4-5 kali, 15-30 detik setiap kali, lalu keluarkan dan tutup hingga kering dengan kertas penyerap. (Gunakan tombak yang tidak terpakai untuk menembus gelembung setelah kering)

7. Pewarnaan: tambahkan 50 µL larutan substrat A kemudian 50 µL larutan B ke dalam masing-masing sumur.Campur perlahan dengan mengocok pelat secara manual, dan inkubasi pada 25 °C selama 15 menit dalam gelap untuk pewarnaan.

8. Determinasi: tambahkan 50 µL stop solution ke dalam masing-masing well.Aduk perlahan dengan mengocok piring secara manual.Atur panjang gelombang pembaca pelat mikro pada 450 nm untuk menentukan nilai OD setiap sumur.(Disarankan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630nm dalam waktu 5 menit).

 

7. Keputusan hasil

Ada dua metode untuk menilai hasil;yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan Amantadine dalam sampel

7.1 Penentuan kualitatif
Kisaran konsentrasi (ng/ml) dapat diperoleh dengan membandingkan rata-rata nilai absorbansi dengan standar.Misalkan nilai absorbansi Sampel Satu adalah 0,3, Sampel Dua adalah 1,0, dan standarnya adalah: 0ppb sebesar 2,243;0,2ppb dari 2,054;0,8ppb dari 1,715;3,2ppb dari 1,074;12,8ppb dari 0,451;51,2ppb dari 0,155.Kemudian konsentrasi sampel satu berada pada kisaran 12.8ppb ~ 51.2ppb;Sampel Dua adalah 3,2ppb ~ 12,8ppb.Kisaran konsentrasi Amantadine dalam sampel dapat diperoleh dengan dikalikan dengan pengenceran sampel yang sesuai.
 

7. 2 Analisis Kuantitatif
Untuk menghitung konsentrasi sampel, kurva standar harus dibuat.Sebelum kurva standar dibuat, konsep % absorbansi harus diketahui.
Perhitungan % absorbansi:

 

Persentase nilai absorbansi =	B	×100%
	B0

 

B—nilai OD rata-rata dari sampel atau larutan standar
B0—nilai OD rata-rata larutan standar 0 ng/mL
Standar nol dengan demikian dibuat sama dengan 100 % dan nilai absorbansi dikutip dalam persentase.Nilai yang dihitung untuk standar dimasukkan ke dalam sistem koordinat pada kertas grafik semilogaritmik terhadap konsentrasi Amantadine [ng/mL].Konsentrasi Amantadine dalam ng/mL (ppb) sesuai dengan absorbansi masing-masing sampel dapat dibaca dari kurva kalibrasi.
Perangkat lunak khusus untuk analisis hasil ELISA akan memfasilitasi penentuan ganda atau ganda.Jika Anda perlu, silakan hubungi untuk meminta.

 

8. Tindakan pencegahan

 

1. Nilai OD standar akan rendah jika suhu ruangan lebih rendah dari 25℃ atau suhu reagen dan sampel belum kembali ke suhu kamar (20-25℃).
2. Pelat mikro dikeringkan selama proses pencucian, yang akan disertai dengan kurva standar yang tidak linier dan reproduktifitas yang buruk;oleh karena itu, lanjutkan ke langkah berikutnya segera setelah dicuci.
3. Aduk rata sebelum menambahkan reagen apa pun.
4. Stop solution adalah larutan asam sulfat 2M, hindari kontak dengan kulit.
5. Jangan gunakan kit setelah tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit dapat mengakibatkan perubahan sensitivitas dan nilai deteksi OD.Jangan mengganti reagen dalam kumpulan kit yang berbeda.
6. Penyimpanan: Simpan pada suhu 2-8°C, jangan dibekukan.Segel kembali pelat mikro yang tidak terpakai dalam kantong penyegel sendiri.Bahan standar dan skrup tidak berwarna peka terhadap cahaya dan tidak dapat langsung terkena cahaya.
7. Buang larutan pewarna yang warnanya menunjukkan bahwa larutan tersebut telah rusak.Nilai deteksi (450/630nm) dari 0 larutan standar (0 ppb) kurang dari 0,5 ((A450nm<0,5)) menunjukkan denaturasinya.
8. Suhu reaksi optimal adalah 25℃.Jika suhu terlalu tinggi atau terlalu rendah, sensitivitas deteksi dan nilai OD akan berubah.

 

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

Penyimpanan: simpan pada 2-8 ℃, tidak beku.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di box.
Catatan: Jika paket Vakum microplate mengalami kebocoran, masih berlaku untuk digunakan, tidak mempengaruhi hasil tes, santai saja untuk digunakan.

 

 

 

 

 

Q1: Kapan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

 

Q2: Apakah ini mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifiknya harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

 

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami telah bersertifikat ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

 

Q4: Bagaimana cara menyediakan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan satu-satu melalui video, telepon, dll.

 

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

 

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga kirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.