Kit Deteksi Cepat Antibodi Metronidazole ELISA Untuk Sensitivitas Honey 96 Wells/Kit 0,05 Ppb

Kit Uji ELISA Metronidazol untuk Honey 96 Wells/Kit Sensitivitas 0,05 ppb

1. Prinsip

Test kit ini didasarkan pada enzim immunoassay kompetitif untuk mendeteksi Metronidazol dalam sampel.Antigen kopling sudah dilapisi sebelumnya pada garis-garis sumur mikro.Metronidazol dalam sampel dan antigen kopling yang telah dilapisi sebelumnya pada garis-garis sumur mikro bersaing untuk mendapatkan antibodi anti-Metronidazol.Setelah penambahan enzim konjugat, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel memiliki korelasi negatif dengan Metronidazol di dalamnya.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan konsentrasi Metronidazol selanjutnya diperoleh.

2. Spesifikasi teknis

Sensitivitas: 0,05ppb
Batas deteksi
Sayang: sekitar 0.1ppb
Catatan: ppb= ng/ml atau ng/g

Laju reaksi silang:
Metronidazol 100%
Ornidazol 83%
Seknidazol 110%
Metronidazol-OH <1%
Tinidazol <1%
Dimetridazol <1%

Tingkat pemulihan: 90±30%
 

3. Komponen

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

1) Peralatan: pembaca pelat mikro (450nm, 630nm), printer, alat pengering nitrogen, vortex, shaker, centrifuge (3000g ke atas), pipet pengukur, timbangan (sensibilitas timbal balik 0,01 g), inkubator (4℃,25℃ ), penangas air, pengatur waktu;
2) Mikropipettor: saluran tunggal 20-200 L, 100-1000 L, dan delapan saluran 30～300 l;
3) Reagen (AR): Na2HPO4▪12H2O,NaH2PO4·2H2O,Etil asetat, Heksana, air deionisasi.

5. Sampel pra-perawatan

instruksi
Poin-poin berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan dari segala jenis sampel:
1) Hanya ujung sekali pakai yang dapat digunakan untuk eksperimen dan ujungnya harus diganti bila digunakan untuk menyerap reagen yang berbeda;
2) Sebelum melakukan percobaan, setiap peralatan percobaan harus dalam keadaan bersih dan bila perlu dibersihkan kembali agar tidak terjadi kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan larutan sebelum sampel pra-perawatan:
1) Penyangga pencuci: 1 bagian 20× penyangga pencuci pekat + 19 bagian air deionisasi.
2) Buffer fosfat 0,2M: timbang 25.8g Na2HPO4▪12H2O, 4.350g NaH2PO4·2H2O, tambahkan 500ml air deionisasi hingga larut sempurna.
 

5.1 Persiapan sampel
Madu
1) Timbang 2,0 ± 0,05 g sampel madu ke dalam tabung centrifuge plastik 50ml;
2) Tambahkan 2ml 0.2M buffer Fosfat, lalu tambahkan 8ml Etil asetat, kocok kuat selama 5 menit (atau gunakan vortex selama 3 menit) untuk membuat sampel kontak dengan fase organik sepenuhnya;
3) Centrifuge di atas 3000 g pada suhu kamar selama 5 menit;
4) Transfer 4ml cairan bening lapisan atas ke dalam tabung centrifuge 5ml (catatan: jangan mengambil fase air lapisan bawah), tiup hingga kering dalam penangas air 50-60℃;
5) Tambahkan 1ml Heksana dan 0,5ml larutan Pelarutan kembali yang sesuai, kocok kuat selama 2 menit (atau gunakan vortex selama 1 menit);
6) Centrifuge di atas 3000 g pada suhu kamar selama 5 menit;
7) Buang fase organik lapisan atas, ambil cairan lapisan bawah 50ul untuk diuji.
Lipatan pengenceran sampel: 0,5

6. Prosedur ELISA

6.1 Instruksi
1) Bawa semua reagen dan strip sumur mikro ke suhu kamar (20-25 ) sebelum digunakan;
2) Kembalikan semua reagen ke 2-8 segera setelah digunakan;
3) Reproduksibilitas analisis ELISA, sebagian besar, tergantung pada konsistensi pencucian piring.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah poin kunci dalam prosedur ELISA;
4) Untuk inkubasi pada suhu konstan, semua sampel dan reagen harus menghindari paparan cahaya, dan setiap lempeng mikro harus disegel oleh membran penutup.

6.2 Prosedur operasi
1. Bawa test kit ke suhu kamar (20-25 ) setidaknya selama 30 menit, perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok agar tercampur secara merata sebelum digunakan, masukkan strip sumur mikro yang diperlukan ke dalam bingkai pelat.Segel kembali microplate yang tidak digunakan, simpan pada suhu 2-8 , jangan dibekukan.
2. Penomoran: beri nomor sumur mikro menurut sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dilakukan dalam rangkap dua, catat posisinya.
3. Tambahkan 50 L sampel atau larutan standar ke dalam sumur duplikat yang terpisah;kemudian tambahkan 50 L larutan kerja antibodi ke dalam setiap sumur, aduk perlahan dengan mengocok pelat secara manual.Tutup mikroplate dengan membran penutup, dan inkubasi pada 4 selama 60 menit dalam gelap.
4. Tuangkan cairan dari microwell, tambahkan 250 L/well washing buffer untuk mencuci microplate selama 15-30 detik, kemudian tuangkan wash buffer dari microwell, tambahkan wash buffer untuk mencuci dengan cara ini selama 3-4 kali, lalu keluarkan dan tutup hingga kering dengan kertas penyerap.
5. Tambahkan konjugat enzim 100ul (jangan meletakkan pelat mikro pada suhu kamar untuk waktu yang lama setelah langkah pencucian untuk menghindari kekeringan pelat mikro menyebabkan perbedaan hasil), aduk perlahan dengan mengocok pelat secara manual.Tutup mikroplate dengan membran penutup, dan inkubasi pada 25 selama 20 menit dalam gelap.Mencuci sebagai langkah 4.
6. Pewarnaan: tambahkan 100ul campuran larutan substrat A dan larutan substrat B ke dalam masing-masing sumur (Catatan: campurkan larutan substrat A dan larutan substrat B pada 1:1, gunakan campuran dalam 10 menit, jangan gunakan logam untuk menampung atau mengaduk, untuk menghindari substrat tidak valid).Aduk perlahan dengan mengocok plat secara manual, tutup mikroplate dengan membran penutup kemudian inkubasi pada suhu 25 selama 15 menit pada gelap untuk pewarnaan.
7. Penentuan: tambahkan 50 L stop solution ke dalam masing-masing sumur.Aduk perlahan dengan mengocok piring secara manual.Berhenti berhasil ketika warna substrat dari biru menjadi kuning.Merekomendasikan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630 nm dalam waktu 5 menit.

7. Hasil penilaian

Ada dua metode untuk menilai hasil: yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan konsentrasi Metronidazol.

7.1 Penentuan kualitatif
Rentang konsentrasi (ng/mL) Metronidazol dapat diperoleh dengan membandingkan nilai OD rata-rata sampel dengan larutan standar.Dengan asumsi bahwa nilai OD sampelⅠ adalah 0,3, dan sampelⅡ adalah 1,0, nilai OD larutan standar adalah: 2,243 untuk 0ppb, 1,816 untuk 0,05ppb, 1,415 untuk 0,15ppb, 0,74 untuk 0,45ppb, 0,313 untuk 1,35ppb , 0,155 untuk 4,05ppb, maka rentang konsentrasi sampelⅠ adalah 1,35 hingga 4,05ppb, dan rentang konsentrasi sampelⅡ adalah 0,05 hingga 0,45ppb.

7.2 Penentuan kuantitatif
Nilai rata-rata nilai absorbansi diperoleh untuk nilai OD rata-rata (B) sampel dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100% yaitu ,

B—nilai OD rata-rata dari sampel atau larutan standar
B0—nilai OD rata-rata dari larutan standar 0 ng/mL
Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritma larutan standar Metronidazol (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan X.Baca konsentrasi sampel yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran yang sesuai, akhirnya diperoleh konsentrasi Metronidazol dalam sampel.
Menggunakan perangkat lunak analisis profesional dari kit ini akan lebih nyaman untuk analisis yang akurat dan cepat dari sejumlah besar sampel.(Silahkan hubungi kami untuk perangkat lunak ini).

8. Tindakan Pencegahan

1. Suhu kamar di bawah 25 atau suhu reagen dan sampel yang tidak dikembalikan ke suhu kamar (20-25 ) akan menyebabkan nilai OD standar yang lebih rendah.
2. Kekeringan pelat mikro dalam proses pencucian akan disertai dengan situasi termasuk kurva standar non-linier dan reproduktifitas yang tidak diinginkan;Jadi lanjutkan ke langkah berikutnya segera setelah mencuci.
3. Campur secara merata, jika tidak akan ada reproduktifitas yang tidak diinginkan.
4. Solusi stop adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak dengan kulit.
5. Jangan gunakan kit melebihi tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit akan menyebabkan perubahan sensitivitas dan nilai OD pendeteksian.Jangan menukar reagen dari kit dengan lot yang berbeda untuk digunakan.
6. Masukkan pelat mikro yang tidak digunakan ke dalam kantong penyegel otomatis untuk menyegelnya kembali.Larutan standar dan pembentuk warna yang tidak berwarna peka terhadap cahaya, dan karenanya tidak dapat langsung terkena cahaya.
7. Buang larutan pewarna dengan warna apapun yang menunjukkan degenerasi larutan ini.Nilai pendeteksian larutan standar 1(0 ppb) kurang dari 0,5 menunjukkan degenerasinya.

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

Penyimpanan: simpan pada 2-8 , tidak beku.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di box.

Q1: Kapan akan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

Q2: Apakah mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifik harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami memiliki sertifikasi ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

Q4: Bagaimana memberikan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan pribadi melalui video, telepon, dll.

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga mengirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.