Phenylethanolamine A ELISA Test Kit Untuk Susu Telur Urine Serum Feed 96 Wells/Kit

Phenylethanolamine A ELISA Test Kit Untuk Susu Telur Urine Serum Feed 96 Wells/Kit

 

1. Prinsip

Kit uji didasarkan pada immunoassay enzim kompetitif untuk mendeteksi Phenylethanolamine A dalam sampel.Antigen terkonjugasi telah dilapisi sebelumnya pada garis-garis sumur mikro.Phenylethanolamine A dalam sampel dan antigen kopling pra-dilapisi pada garis-garis mikro-well bersaing untuk antibodi anti-Phenylethanolamine A.Setelah penambahan enzim konjugat, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel berkorelasi negatif dengan konsentrasi Phenylethanolamine A dalam sampel.Nilai tersebut dibandingkan dengan kurva standar dan konsentrasi Phenylethanolamine A selanjutnya diperoleh.

 

2. Spesifikasi teknis

Sensitivitas: 0,1 ppb
Suhu inkubator: 25
Waktu inkubator: 30 menit 15 menit

Batas deteksi
Tisu 0.2 ppb
Umpan 0,5 ppb

Reaksi silang:
Phenylethanolamine A 100%
Ractopamine <1%
Salbutamol <1%
Klor <1%
Tingkat pemulihan
Tisu, pakan 85±25%

 

3. Komponen

 

1	Strip sumur mikro	12 strip dengan 8 yang dapat dilepas sumur masing-masing
2	6× larutan standar (masing-masing 1mL)	0ppb	0.1ppb
		0.3ppb	0.9ppb
		2.7ppb	8.1ppb
3	Konjugasi enzim	7ml	topi merah
4	Solusi kerja antibodi	7ml	topi biru
5	Substrat A	7ml	topi putih
6	SubstratB	7ml	topi hitam
7	Hentikan solusi	7ml	topi kuning
8	20 × buffer pencuci terkonsentrasi	40ml	topi putih
9	2 × larutan pelarutan kembali pekat	50ml	topi transparan

 

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

1) Peralatan: pembaca pelat mikro, printer, homogenizer, alat pengering nitrogen, osilator, centrifuge, pipet ukur, timbangan (sensibilitas timbal balik 0,01 g), inkubator.
2) Mikropipettor: saluran tunggal 20-200 L dan 100-1000 L, dan multi-saluran 30-300 L;
3) Reagen: Etil asetat, N-heksana, Asam asetat glasial

 

5. Sampel pra-perawatan

Instruksi (Hal-hal berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan)
1) Hanya ujung sekali pakai yang dapat digunakan untuk eksperimen dan ujungnya harus diganti bila digunakan untuk menyerap reagen yang berbeda;
2) Sebelum percobaan, setiap alat percobaan harus bersih dan bila perlu dibersihkan kembali untuk menghindari kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan larutan sebelum sampel pra-perawatan:
1) Contoh larutan ekstraksi: ambil 99ml etil asetat, tambahkan 1 ml asam asetat glasial, dan aduk rata.
2) Contoh larutan pelarutan kembali: larutan pelarutan kembali 2xkonsentrat diencerkan dengan air deionisasi pada 1:1 (1mL larutan pelarutan kembali pekat + 1mL air deionisasi), digunakan untuk pelarutan kembali sampel.

Persiapan sampel
5.1 Umpan
1. Giling sampel, ambil 1,0±0,05g ke dalam tabung centrifuge 50ml;
2. Tambahkan 10 mL larutan ekstraksi sampel, kocok dengan osilator selama 3 menit;
3. Centrifuge pada 4000 r/min pada suhu kamar selama 10 menit;
4. Ambil 2 ml supernatan, keringkan dengan nitrogen atau udara pada suhu 50-60 ;
5. Tambahkan 1 ml N-heksana, lalu tambahkan 1 ml Larutan pelarutan kembali sampel, kocok selama 30 detik;
6. Sentrifugasi pada 4000 r/min pada suhu kamar selama 10 menit, buang fase organik lapisan atas.
7. Ambil 20 L lapisan bawah untuk analisis.
Lipatan pengenceran sampel: 5
(Karena ada gangguan sampel, rekomendasikan2PPB sebagai nilai CUT OFF sampel.)

5.2 Tisu
1. Ambil sampel jaringan homogen 2.0±0.05g ke dalam tabung centrifuge 50ml;
2.Tambahkan 8 mL Larutan ekstraksi sampel, kocok dengan osilator selama 2 menit;
3.Centrifuge pada 4000 putaran/menit pada suhu kamar selama 10 menit;
4. Ambil 2 ml supernatan, keringkan dengan nitrogen atau udara pada 50-60 ;
5.Tambahkan 1 ml N-heksana, lalu tambahkan 1ml Larutan pelarutan kembali sampel, kocok selama 30 detik;
6.Sentrifugasi pada 4000 r/min pada suhu kamar selama 10 menit, lepaskan fase organik lapisan atas.
7.Ambil 20 L lapisan bawah untuk analisis.
Lipatan pengenceran sampel: 2
(Karena ada gangguan sampel, rekomendasikan 1PPB sebagai nilai CUT OFF sampel.)

 

6. Prosedur ELISA

6.1Instruksi
1. Bawa semua reagen dan strip sumur mikro ke suhu kamar (20-25 ) sebelum digunakan.
2. Kembalikan semua reagen ke 2-8 segera setelah digunakan.
3. Reproduksibilitas analisis ELISA, sebagian besar, tergantung pada konsistensi pencucian piring.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah poin kunci dalam prosedur ELISA.
4. Untuk inkubasi pada suhu konstan, semua sampel dan reagen harus menghindari paparan cahaya, dan setiap lempeng mikro harus disegel oleh membran penutup.

6.2Prosedur operasi
1. Bawa test kit ke suhu kamar (20-25 ) setidaknya selama 30 menit, perhatikan bahwa setiap reagen cair harus dikocok agar tercampur secara merata sebelum digunakan.
2. Persiapan larutan: Encerkan buffer pencuci konsentrat 40ml 20x dengan air deionisasi pada 1:19 (1 bagian 20x buffer pencuci konsentrat + 19 bagian air deionisasi), atau siapkan sesuai jumlah yang dibutuhkan.
3. Masukkan strip sumur mikro yang diperlukan ke dalam rangka pelat.Segel kembali microplate yang tidak digunakan, disimpan pada 2-8 , tidak beku.
4. Penomoran: beri nomor sumur mikro menurut sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dilakukan dalam rangkap dua;merekam posisi mereka.
5. Tambahkan 50 L sampel atau larutan standar ke dalam sumur duplikat yang terpisah;tambahkan 50 L enzim konjugat, kemudian tambahkan 50 L larutan kerja antibodi ke dalam setiap sumur, tutup mikroplate dengan membran penutup, dan inkubasi pada suhu 25 selama 30 menit.
6. Tuangkan cairan dari microwell, tutup hingga kering di atas kertas penyerap;tambahkan 250 L/sumur air deionisasi, cuci selama 15-30 detik, lalu keluarkan dan tutup hingga kering dengan kertas penyerap, ulangi 4-5 kali.
7. Pewarnaan: tambahkan 50 L larutan substrat A, 50 L larutan B ke dalam masing-masing sumur.Campur perlahan dengan mengocok pelat secara manual, dan inkubasi pada 25 selama 15 menit pada gelap untuk pewarnaan.
8. Penentuan: tambahkan 50 L stop solution ke dalam setiap sumur.Aduk perlahan dengan mengocok piring secara manual.Atur panjang gelombang pembaca lempeng mikro pada 450 nm untuk menentukan nilai OD setiap sumur.(Merekomendasikan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630 nm dalam waktu 5 menit).

 

7. Hasil penilaian

Ada dua metode untuk menilai hasil;yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan Phenylethanolamine A dalam sampel.

7.1 Penentuan kualitatif
Rentang konsentrasi (ng/mL) dapat diperoleh dari perbandingan nilai OD rata-rata sampel dengan larutan standar.Dengan asumsi bahwa nilai OD sampelⅠ adalah 0,3, dan sampelⅡ adalah 1,0, nilai OD larutan standar adalah: 2,243 untuk 0ppb, 1,866 untuk 0,1ppb, 1,415 untuk 0,3ppb, 0,864 untuk 0,9ppb, 0,413 untuk 2,7ppb , 0,155 untuk 8.1ppb, maka rentang konsentrasi sampelⅠ adalah 0,3 hingga 0,9ppb, dan rentang konsentrasi sampelⅡ adalah 2,7ppb hingga 8.1ppb.

7.2 Penentuan kuantitatif
Nilai rata-rata nilai absorbansi yang diperoleh untuk nilai OD rata-rata (B) sampel dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100%, yaitu

 

Persentase nilai absorbansi =	B	×100%
	B0

 

B—nilai OD rata-rata dari sampel atau larutan standar
B0—nilai OD rata-rata dari larutan standar 0 ng/mL
Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritma larutan standar Phenylethanolamine A (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan X.Baca konsentrasi sampel yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran yang sesuai, akhirnya diperoleh konsentrasi Phenylethanolamine A yang sebenarnya dalam sampel.
Menggunakan perangkat lunak analisis profesional dari kit ini akan lebih nyaman untuk analisis yang akurat dan cepat dari sejumlah besar sampel.(Silahkan hubungi kami untuk perangkat lunak ini)

8. Tindakan Pencegahan

1. Suhu kamar di bawah 25 atau suhu reagen dan sampel yang tidak dikembalikan ke suhu kamar (20-25 ) akan menyebabkan nilai OD standar yang lebih rendah.
2. Kekeringan pelat mikro dalam proses pencucian akan disertai dengan situasi termasuk kurva standar non-linier dan reproduktifitas yang tidak diinginkan;Jadi lanjutkan ke langkah berikutnya segera setelah mencuci.
3. Aduk rata, cuci piring sepenuhnya, reproduktifitas analisis ELISA, sebagian besar, tergantung pada konsistensi pencucian piring.
4. Solusi stop adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak dengan kulit.
5. Jangan gunakan kit melebihi tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit akan menyebabkan perubahan sensitivitas dan nilai OD pendeteksian.Jangan menukar reagen dari kit dengan nomor lot yang berbeda untuk digunakan.
6. Masukkan pelat mikro yang tidak digunakan ke dalam kantong penyegel otomatis untuk menyegelnya kembali.Zat standar dan pembentuk warna tidak berwarna peka terhadap cahaya, sehingga tidak dapat langsung terkena cahaya.
7. Buang larutan pewarna dengan warna apapun yang menunjukkan degenerasi larutan ini.Nilai pendeteksian larutan standar 0 kurang dari 0,5 (A450 nm<0,5) menunjukkan degenerasinya.
8. Suhu reaksi optimum adalah 25 , dan suhu yang terlalu tinggi atau rendah akan mengakibatkan perubahan sensitivitas pendeteksian dan nilai OD.

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

Penyimpanan: simpan pada 2-8 , tidak beku.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di box.
Catatan: Jika paket Vakum microplate memiliki kebocoran, itu masih berlaku untuk digunakan, tidak mempengaruhi hasil tes, santai untuk digunakan.

 

 

 

 

 

Q1: Kapan akan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

 

Q2: Apakah mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifik harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

 

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami memiliki sertifikasi ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

 

Q4: Bagaimana memberikan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan pribadi melalui video, telepon, dll.

 

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

 

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga mengirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.