MQCA Diagnostic ELISA Kit Untuk Ayam Babi Bebek 96 Sumur/Kit Sensitivitas 0.5 Ppb

MQCA ELISA Test Kit untuk Ayam Bebek Babi 96 Sumur/Sensitivitas Kit 0,5 ppb

 

1. Prinsip

Kit uji ini didasarkan pada immunoassay enzim kompetitif untuk mendeteksi MQCA dalam sampel.Antigen kopling sudah dilapisi sebelumnya pada garis mikro-sumur.MQCA dalam sampel dan antigen kopling yang dilapisi sebelumnya pada garis sumur mikro bersaing untuk mendapatkan antibodi anti-MQCA.Setelah penambahan konjugat enzim, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel memiliki korelasi negatif dengan MQCA di dalamnya.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan konsentrasi MQCA kemudian diperoleh.

 

2. Spesifikasi teknis

Sensitivitas: 0,5 ppb
Suhu inkubator: 25 ℃
Waktu inkubator: 30 menit～15 menit

Batas deteksi:
Tissue 1 ppb

Laju reaksi silang:
MQCA 100%
Olaquindoks <0,1%
Tingkat pemulihan:
Jaringan 85%±10%

 

3. Komponen

 

1	Strip sumur mikro	12 strip dengan masing-masing 8 sumur yang dapat dilepas
2	6× larutan standar (masing-masing 1 mL)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Konjugat Enzim Terkonsentrasi	1 ml	topi merah
4	Solusi kerja antibodi	8 ml	topi biru
5	Substrat A	7 ml	topi putih
6	SubstratB	7 ml	topi hitam
7	Hentikan solusi	7 ml	topi kuning
8	Solusi pelarutan kembali	50 ml	topi transparan
9	20x buffer pencuci pekat	40 ml	topi putih

 

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

1) Peralatan: pembaca pelat mikro (450 nm / 630 nm), homogenizer, osilator, centrifuge, pipet ukur, alat pengering nitrogen dan neraca (kebalikan kepekaan 0,01 g), Inkubator.
2) Mikropipet: saluran tunggal 20 hingga 200 µL dan 100 hingga 1000 µL dan multi-saluran 30～300 µl;
3) Reagen: Etil asetat, n-heksana, HCl, NaCl, CH3CN

 

5. Contoh pra-perawatan

Instruksi
Poin-poin berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan sampel apa pun:
1) Hanya tip sekali pakai yang dapat digunakan untuk percobaan dan tip harus diganti saat digunakan untuk menyerap reagen yang berbeda;
2) Sebelum percobaan, setiap peralatan percobaan harus diperiksa kebersihannya dan bila perlu dibersihkan kembali, untuk menghindari kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan sampel
1) Ekstrak sampel (Simpan pada suhu 2~8℃ selama 1 bulan): Ambil 8,6 ml HCl pekat, tambahkan air deionisasi hingga 500 ml, lalu tambahkan 10g NaCl untuk mendapatkan ekstrak sampel.

5.1 Ternak dan jaringan unggas (Ayam, bebek, babi):
1. Ambil 2 ± 0,05 g sampel yang telah dihomogenisasi ke dalam tabung sentrifus 50 ml;
2. Tambahkan 4 mL Ekstrak sampel, kocok rata selama 1 menit;
3. Tambahkan 4ml Ethyl acetate dan 2ml CH3CN, kocok dengan benar selama 10 detik;Centrifuge pada 4000 r/min pada suhu kamar (20 - 25 ℃) selama 10 menit (Catatan: Langkah ini hanya perlu dikocok selama 10 detik, dikocok terlalu lama akan menyebabkan Emulsifikasi, jika muncul Emulsifikasi, ambil supernatan tertentu, lalu kocok perlahan tabung selama 5 detik , centrifuge lagi kemudian bisa mendapatkan supernatan yang cukup);
4. Ambil 3 mL fase organik lapisan atas ke dalam wadah bening, di bawah keringkan dengan Nitrogen atau udara di
56 ℃ air mandi;
5. Tambahkan 1 ml N-heksana, kocok selama 30 detik, lalu tambahkan 0,5 ml larutan Redissolving, kocok dan aduk rata selama 30 detik;centrifuge pada 4000 r / mnt pada suhu kamar (20-25 ℃) selama 5 menit.
6. Buang fasa organik lapisan atas. Ambil 50 µL lapisan bawah untuk dianalisis.
Lipat pengenceran sampel: 0,5

 

6. Prosedur ELISA

6.1 Instruksi
1) Bawa semua reagen dan strip sumur mikro ke suhu kamar (20-25 ℃) sebelum digunakan;
2) Kembalikan semua reagen ke 2-8 ℃ segera setelah digunakan;
3) Reprodusibilitas analisis ELISA, sebagian besar, bergantung pada konsistensi pencucian pelat.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah titik kunci dalam prosedur ELISA;
4) Untuk inkubasi pada suhu konstan, semua sampel dan reagen harus menghindari paparan cahaya, dan setiap pelat mikro harus ditutup dengan membran penutup.

6.2 Prosedur operasi
1) Keluarkan semua reagen yang diperlukan dan tempatkan pada suhu kamar (20-25 ℃) setidaknya selama 30 menit.Perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok agar tercampur merata sebelum digunakan;
2) Ambil strip sumur mikro dan bingkai pelat yang diperlukan.Tutup kembali pelat mikro yang tidak terpakai, disimpan pada suhu 2-8 ℃;
3) Persiapan larutan: encerkan 40 mL buffer pencuci pekat 20× dengan air deionisasi pada 1 :19 (1 bagian buffer pencuci pekat 20× + 19 bagian air deionisasi), atau siapkan sesuai kebutuhan;
4) Penomoran: beri nomor sumur mikro menurut sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dilakukan dalam rangkap dua;merekam posisi mereka;
5) Siapkan larutan campuran larutan kerja antibodi dan konjugat Enzim Konsentrat: Campurkan larutan kerja antibodi dan konjugat Enzim Konsentrat pada 10:1 secara merata (larutan kerja antibodi 1000ul + konjugat Enzim Konsentrat 100ul, larutan campuran ini harus digunakan setelah disiapkan, tidak bisa disimpan, jumlah paket memiliki jumlah ekstra, siapkan proporsinya OK.)
6) Tambahkan 20 µL sampel atau larutan standar untuk memisahkan sumur duplikat, kemudian tambahkan 70 µL larutan campuran larutan kerja antibodi dan Concentrated Enzyme conjugate ke dalam masing-masing sumur.Campur dengan mengocok perlahan, tutup pelat mikro dengan membran penutup, dan inkubasi pada 25 ℃ pada gelap selama 30 menit;
7) Cuci lempeng mikro dengan bufer pencuci sebanyak 250 µL/sumur sebanyak empat sampai lima kali;rendam sumur dengan washing buffer selama 15-30 detik, tutup hingga kering dengan kertas penyerap (jika ada gelembung setelah mengepak, potong dengan ujung yang bersih);
8) Pewarnaan: tambahkan 50 µL larutan substrat A dan 50 µL larutan B ke dalam masing-masing sumur.Campur dengan mengocok perlahan, dan inkubasi pada 25 ℃ selama 15 menit dalam gelap untuk pewarnaan;
9) Penentuan: tambahkan 50 µL stop solution ke dalam masing-masing sumur.Campur dengan mengocok perlahan.Atur panjang gelombang microplate reader pada 450 nm untuk menentukan nilai OD.(disarankan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630 nm dalam 5 menit).

 

7. Keputusan hasil

Ada dua metode untuk menilai hasil;yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan kandungan MQCA.

7.1 Penentuan kualitatif
Kisaran konsentrasi (ng/mL) dapat diperoleh dari perbandingan rata-rata nilai OD sampel dengan larutan standar.Dengan asumsi nilai OD sampel Ⅰ adalah 0,3, dan sampel Ⅱ adalah 1,0, sedangkan larutan bakunya adalah sebagai berikut: 2,043 untuk 0 ppb, 1,716 untuk 0,5 ppb, 1,215 untuk 1,5 ppb, 0,74 untuk 4,5 ppb, 0,313 untuk 13,5 ppb dan 0,155 untuk 40,5 ppb, dengan demikian kisaran konsentrasi sampelⅠadalah 13,5 hingga 40,5ppb, dan sampel Ⅱ adalah 1,5 hingga 4,5 ppb.

7.2 Penentuan kuantitatif
Nilai rata-rata nilai absorbansi setara dengan persentase rata-rata nilai OD (B) sampel dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100%. , itu adalah,

 

Persentase nilai absorbansi =	B	×100%
	B0

 

 

B—rata-rata (sumur ganda) nilai OD dari sampel atau larutan standar
B0—nilai OD rata-rata larutan standar 0 ng/mL
Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritma larutan standar MQCA (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan sumbu X.Baca konsentrasi sampel yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran yang sesuai, sehingga akhirnya diperoleh konsentrasi MQCA dalam sampel.
Menggunakan perangkat lunak analisis profesional kit ini akan lebih nyaman untuk analisis sampel dalam jumlah besar yang akurat dan cepat.(Silakan hubungi kami untuk perangkat lunak ini)

 

8. Tindakan pencegahan

1. Suhu ruangan di bawah 25 ℃ atau suhu reagen dan sampel yang tidak dikembalikan ke suhu kamar (20-25 ℃) akan menyebabkan nilai OD standar yang lebih rendah
2. Kekeringan pelat mikro dalam proses pencucian akan disertai dengan situasi termasuk kurva standar non-linier dan reproduktifitas yang tidak diinginkan
3. Campur setiap reagen dan campuran reaksi secara merata dan cuci pelat mikro secara menyeluruh, jika tidak maka akan terjadi reproduktifitas yang tidak diinginkan
4. Solusi berhenti adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak dengan kulit;
5. Masukkan pelat mikro yang tidak terpakai ke dalam kantong penyegelan otomatis untuk menyegelnya kembali.Zat standar dan pembentuk warna tidak berwarna peka terhadap cahaya, sehingga tidak dapat langsung terkena cahaya
6. Jangan gunakan kit melebihi tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit akan menyebabkan perubahan sensitivitas dan nilai OD pendeteksian.Jangan menukar reagen dari kit dengan nomor lot berbeda untuk digunakan
7. Buang larutan pewarna dengan warna yang menunjukkan degenerasi larutan ini.Nilai pendeteksian larutan standar 0 kurang dari 0,5 menunjukkan degenerasinya
8. Suhu reaksi optimal adalah 25 ℃, dan suhu yang terlalu tinggi atau terlalu rendah akan menyebabkan perubahan pada sensitivitas pendeteksian dan nilai OD.

 

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

Penyimpanan: simpan pada 2-8 ℃, tidak beku.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di box.
Catatan: Jika paket Vakum microplate mengalami kebocoran, masih berlaku untuk digunakan, tidak mempengaruhi hasil tes, santai saja untuk digunakan.

 

 

 

 

 

Q1: Kapan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

 

Q2: Apakah ini mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifiknya harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

 

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami telah bersertifikat ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

 

Q4: Bagaimana cara menyediakan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan satu-satu melalui video, telepon, dll.

 

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

 

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga kirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.