Beta Agonis ELISA Kit Untuk Tes Serum Susu Telur Urine Babi Ayam 96 Sumur/Kit

Beta Agonis ELISA Kit Untuk Susu Telur Urine Serum Daging Babi Ayam 96 Sumur/Kit

 

1. Prinsip

Kit uji -agonis didasarkan pada immunoassay enzim kompetitif untuk mendeteksi -agonis dalam sampel.Antigen kopling sudah dilapisi sebelumnya pada garis-garis sumur mikro.-agonis dalam sampel dan antigen kopling yang telah dilapisi sebelumnya pada garis-garis sumur mikro bersaing untuk mendapatkan antibodi anti--agonis.Setelah penambahan enzim konjugat, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel memiliki korelasi negatif dengan -agonis dalam sampel.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan residu -agonis selanjutnya diperoleh.

 

2. Spesifikasi teknis

Sensitivitas: 0,1 ppb
Suhu inkubasi: 25
Waktu inkubasi: 30 menit 15 menit

Batas deteksi:
Urin babi 0.3ppb
Daging babi 0.6ppb

Laju reaksi silang: Klor 100%, Cimaterol <4%, Brombuterol 60%, Mabuterol 108%, Bambuterol <5%, Klorprenalin <1%, Salbutamol 75%, Terbutalin 25%, Penbutolol 19%, Tulobuterol 23%, Fenoterol < 0,1%, Ractopamine <0,1%

Tingkat pemulihan:
Urine babi, babi 90%±30%

 

3. Komponen

 

1	Strip sumur mikro	12 strip dengan 8 yang dapat dilepas sumur masing-masing
2	6× larutan standar (masing-masing 1 mL)	0ppb	0.1ppb
		0.3ppb	0.9ppb
		2.7ppb	8.1ppb
3	Konjugasi enzim	7ml	topi merah
4	Solusi kerja antibodi	10ml	topi biru
5	Substrat A	7ml	topi putih
6	SubstratB	7ml	topi hitam
7	Hentikan solusi	7ml	topi kuning
8	20 × buffer pencuci terkonsentrasi	40ml	topi putih
9	5 × larutan ekstraksi sampel	50ml	topi transparan

 

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

1) Peralatan : microplate reader, printer, homogenizer, vortex, oscillator, centrifuge, Incubator, pipet ukur, timbangan (sensibility reciprocal 0,01 g)
2) Mikropipettor: saluran tunggal 20-200µL, 100-1000µL, dan multi-saluran 30-300µL;
3) Reagen: NaOH, HCI.

 

5. Sampel pra-perawatan

Instruksi (Hal-hal berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan)
1) Hanya ujung sekali pakai yang dapat digunakan untuk eksperimen dan ujungnya harus diganti bila digunakan untuk menyerap reagen yang berbeda;
2) Sebelum percobaan, setiap alat percobaan harus bersih dan bila perlu dibersihkan kembali untuk menghindari kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan larutan sebelum sampel pra-perawatan:
1) 0.2M HCI: larutkan 17.2mL HCI dalam air deionisasi menjadi 1L.
2) 1M NaOH: larutkan 4g NaOH dalam air deionisasi hingga 100 mL.
3) Larutan ekstraksi sampel: 1 bagian 5X larutan ekstraksi sampel + 4 bagian air deionisasi, aduk rata.

5.1 Urine babi
Ambil 20 L urin bening, deteksi langsung (Jika urin keruh, harus disaring atau disentrifugasi dengan kecepatan 4000 r/menit selama 10 menit, lalu ambil urin bening).Simpan di lingkungan beku jika tidak digunakan.
Lipatan pengenceran sampel: 1

5.2 Daging Babi
1. Timbang 2±0,05g sampel jaringan yang telah dihomogenkan ke dalam tabung sentrifus 50ml, tambahkan 3ml HCl 0,2M, kocok selama 3 menit.
2. Kemudian tambahkan 600ul 1M larutan NaOH dan 2,4ml Sampel ekstrak larutan, kocok selama 3 menit, centrifuge pada 4000 r/min pada suhu kamar (20-25 ) selama 10 menit.
3. Ambil 20µL cairan lapisan atas untuk analisis. (Catatan: jika ada lapisan lemak setelah centrifuge, buang lapisan lemak atau pisahkan lapisan lemak, ambil cairan bening untuk analisis)
Lipatan pengenceran sampel: 4

 

6. Prosedur ELISA

6.1Instruksi
1. Bawa semua reagen dan strip sumur mikro ke suhu kamar (20-25 ) sebelum digunakan;
2. Kembalikan semua reagen ke 2-8 segera setelah digunakan;
3. Reproduksibilitas analisis ELISA, sebagian besar, tergantung pada konsistensi pencucian piring.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah poin kunci dalam prosedur ELISA;
4. Untuk inkubasi pada suhu konstan, semua sampel dan reagen harus menghindari paparan cahaya, dan setiap lempeng mikro harus disegel oleh membran penutup.

6.2Prosedur operasi
1. Bawa test kit ke suhu kamar (20-25 ) setidaknya selama 30 menit, perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok secara merata sebelum digunakan;
2. Masukkan strip sumur mikro yang diperlukan ke dalam rangka pelat.Segel kembali microplate yang tidak digunakan, disimpan pada 2-8 , tidak beku.
3. Encerkan buffer pencuci konsentrat 40ml 20X pada 1:19 dengan air deionisasi (1 bagian buffer pencuci konsentrat 20X + 19 bagian air deionisasi).Atau siapkan sesuai jumlah yang dibutuhkan.
4. Penomoran: beri nomor sumur mikro menurut sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dilakukan dalam rangkap dua;merekam posisi mereka.
5. Tambahkan 20µL sampel atau larutan standar ke dalam sumur duplikat yang terpisah, kemudian tambahkan enzim konjugat, 50ul/sumur;kemudian tambahkan larutan kerja antibodi, 80µL/well.Aduk perlahan dengan mengocok plat secara manual, tutup mikroplate dengan membran penutup, inkubasi pada suhu 25 selama 30 menit.
6. Tuang cairan dari microwell, tambahkan 250µL/well washing buffer, cuci 4-5 kali, 15-30 detik setiap kali, lalu keluarkan dan tutup dengan kertas penyerap (jika ada gelembung setelah mengepak, potong dengan tips bersih).
7. Pewarnaan: tambahkan 50µL substrat A, lalu tambahkan 50µL substrat B ke masing-masing sumur.Campur perlahan dengan mengocok pelat secara manual, dan inkubasi pada suhu 25 selama 15 menit gelap untuk pewarnaan.
8. Penentuan: tambahkan 50µL stop solution ke dalam setiap sumur.Aduk perlahan dengan mengocok piring secara manual.Atur panjang gelombang pembaca pelat mikro pada 450nm untuk menentukan nilai OD setiap sumur.(Merekomendasikan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630nm dalam waktu 5 menit).

 

7. Hasil penilaian

Ada dua metode untuk menilai hasil;yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan konsentrasi -agonis dalam sampel.

7.1 Penentuan kualitatif
Rentang konsentrasi (ng/mL) diperoleh dari membandingkan nilai OD rata-rata sampel dengan larutan standar.Dengan asumsi bahwa nilai OD sampel adalah 0,3, dan sampel adalah 1,0, nilai OD larutan standar adalah: 2,243 untuk 0ppb, 1,816 untuk 0,1ppb, 1,415 untuk 0,3ppb, 0,74 untuk 0,9ppb, 0,313 untuk 2,7ppb, 0,155 untuk 8.1ppb, maka rentang konsentrasi sampel adalah 2,7 hingga 8,1ppb, dan rentang konsentrasi sampel adalah 0,3 hingga 0,9ppb.

7.2 Penentuan kuantitatif
Nilai rata-rata nilai absorbansi yang diperoleh untuk nilai OD rata-rata (B) sampel dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100%, yaitu

 

Persentase nilai absorbansi =	B	×100%
	B0

 

B—nilai OD rata-rata (sumur ganda) dari sampel atau larutan standar
B0—nilai OD rata-rata dari larutan standar 0 ng/mL
Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritma larutan standar agonis (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan X.Baca konsentrasi sampel yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran, akhirnya diperoleh konsentrasi -agonis dalam sampel.

 

8. Tindakan Pencegahan

1.Suhu kamar di bawah 25 atau suhu reagen dan sampel yang tidak dikembalikan ke suhu kamar (20-25 ) akan menyebabkan nilai OD standar yang lebih rendah.
2.Kekeringan pelat mikro dalam proses pencucian akan disertai dengan situasi termasuk kurva standar non-linier dan reproduktifitas yang tidak diinginkan;Jadi lanjutkan ke langkah berikutnya segera setelah mencuci.
3.Campur secara merata, jika tidak akan ada reproduktifitas yang tidak diinginkan.
4. Solusi stop adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak dengan kulit.
5. Jangan gunakan kit melebihi tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit akan menyebabkan perubahan sensitivitas dan nilai OD pendeteksian.Jangan menukar reagen dari kit dengan nomor lot yang berbeda untuk digunakan.
6. Masukkan pelat mikro yang tidak digunakan ke dalam kantong penyegel otomatis untuk menyegelnya kembali.Zat standar dan pembentuk warna tidak berwarna peka terhadap cahaya, sehingga tidak dapat langsung terkena cahaya.
7. Buang larutan pewarna dengan warna apapun yang menunjukkan degenerasi larutan ini.Nilai pendeteksian larutan standar 0 (0 ppb) kurang dari 0,5 menunjukkan degenerasinya.
8. Suhu reaksi optimum adalah 25 , dan suhu yang terlalu tinggi atau terlalu rendah akan mengakibatkan perubahan sensitivitas pendeteksian dan nilai OD.

 

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

Penyimpanan: simpan pada 2-8 , tidak beku.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di box.
Keterangan: Jika paket vakum pelat mikrotiter mengalami kebocoran, pelat mikrotiter normal dan efektif, tidak mempengaruhi hasil percobaan.Silakan gunakan.

 

 

 

 

 

Q1: Kapan akan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

 

Q2: Apakah mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifik harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

 

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami memiliki sertifikasi ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

 

Q4: Bagaimana memberikan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan pribadi melalui video, telepon, dll.

 

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

 

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga mengirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.