Udang Nitrofuran AMOZ 0.03ppb Diagnostik ELISA Kit Untuk Sensitivitas Keamanan Pangan Susu 96Wells/Kit

Kit ELISA Diagnostik Nitrofuran AMOZ untuk Sensitivitas Susu 0,03ppb 96Wells/Kit

 

1.Kit ELISA DiagnostikPrinsip

Kit deteksi ini didasarkan pada enzim immunoassay yang kompetitif untuk mendeteksi AMOZ dalam sampel.Antigen terkonjugasi dilapisi sebelumnya pada strip microwell.AMOZ dalam sampel bersaing dengan antigen terkonjugasi yang dilapisi sebelumnya pada strip microwell untuk antibodi anti-AMOZ.Setelah konjugat enzim ditambahkan, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel berkorelasi negatif dengan AMOZ di dalamnya.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan konsentrasi AMOZ selanjutnya diperoleh.

 

2. Spesifikasi teknis

 

Sensitivitas: 0,03ppb

Suhu Inkubasi: 25 ℃

Waktu Inkubasi: 30 menit～15 menit

Batas deteksi Tisu, telur, madu: 0,1ppb

Laju reaksi silang

AMOZ 100%

AHD < 0,1%

AOZ < 0,1%

SEM <0,1%

Tingkat pemulihan

Tisu 80 ± 25%

Madu 75 ± 25%

Telur 95 ± 25%

 

3.Alat Uji Keamanan Pangan Nitrofuran AMOZ ELISA​Komponen

 

1	Strip sumur mikro	12 strip dengan 8 dilepas sumur masing-masing
2	6× larutan standar (masing-masing 1 mL)	0ppb	0,03ppb
		0,09ppb	0,27ppb
		0,81ppb	2,43ppb
3	Konjugasi enzim	7ml	topi merah
4	Solusi kerja antibodi	7ml	topi biru
5	Substrat A	7ml	topi putih
6	SubstratB	7ml	topi hitam
7	Hentikan solusi	7ml	topi kuning
8	20x buffer pencuci pekat	40ml	topi putih
9	2x larutan larut kembali pekat	50ml	topi transparan
10	2-Nitrobenzaldehid (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehid (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldehid (C7H5NO3)

 

 

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan
1) Peralatan: microplate reader, printer, homogenizer, pengering nitrogen, vortexer, centrifuge, tabung ukur, neraca (timbal balik 0,01g), inkubator, penangas air;
2) Mikropipet: saluran tunggal 20-200µL, 100-1000µL, multi-saluran 30-300µl;
3) Reagen: NaOH, etil asetat, n-heksana, HCl (sekitar 36,5%), K2HPO4 3H2O

5. Persiapan Sampel

menginstruksikan
Poin-poin berikut harus ditangani sebelum pretreatment sampel apa pun:
1) Eksperimen hanya dapat menggunakan tip sekali pakai, dan tip harus diganti saat menyedot reagen yang berbeda;
2) Sebelum percobaan, setiap peralatan percobaan harus dibersihkan dan dibersihkan kembali bila perlu untuk menghindari kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan larutan sebelum pretreatment sampel:
1) 0,1 M K2HPO4: Larutkan 11,4 g K2HPO4 · 3H2O dalam air deionisasi hingga 500 mL.
2) HCl 1 M: Larutkan 8,6 mL HCl (sekitar 36,5%) dalam air deionisasi hingga 100 mL.
3) 1 M NaOH: Larutkan 4 g NaOH dalam air deionisasi hingga 100 mL.
4) Encerkan larutan pelarutan ulang pekat 2× dengan air deionisasi pada perbandingan 1:1 (1 mL larutan pelarutan ulang pekat + 1 mL air deionisasi) untuk sampel pelarutan ulang.

 

5.1 Persiapan sampel

sebuah)Tisu, telur
1) Timbang 1±0,05g sampel homogen, tambahkan 4mL air suling, 0,5mL HCl 1M dan 100µL 2-nitrobenzaldehida (C7H5NO3) ke setiap tabung, dan kocok dengan tepat selama 2 menit;
2) Inkubasi semalaman pada suhu 37°C (sekitar 16 jam) atau dalam penangas air pada suhu 56°C (2 jam).
3) Tambahkan 5mL 0,1M K2HPO4, 0,4mL 1M NaOH dan 6mL etil asetat ke masing-masing tabung dan kocok selama 30 detik.
4) Centrifuge pada suhu kamar (20-25°C) di atas 4000r/min selama 10 menit (jika terjadi emulsifikasi atau lapisan etil asetat kurang dari 3ml, inkubasikan sampel dalam penangas air pada suhu 80°C selama 10 menit, dan centrifuge berulang kali; atau meningkatkan kecepatan dan memperpanjang waktu sentrifugasi).
5) Pindahkan 3 mL lapisan etil asetat ke dalam tabung sentrifus baru dan evaporasi hingga kering dengan nitrogen atau udara pada suhu 50°C.
6) Larutkan residu kering dalam 2 mL n-heksana, tambahkan 1 mL larutan rekonstitusi yang diencerkan, aduk rata selama 30 detik, sentrifus pada suhu kamar (20-25°C) dengan kecepatan lebih dari 4000 rpm selama 10 menit;menghilangkan fase n-heksana atas.(Jika emulsifikasi terjadi, hilangkan fase n-heksana bagian atas, inkubasi sampel dalam penangas air 70°C selama 10-20 menit, dan sentrifus berulang kali).
7) Ambil 50 µL lapisan bawah untuk dianalisis.
Faktor pengenceran sampel: 2

b) madu
1) Timbang 2 ± 0,05 g sampel homogen (madu), tambahkan 4 mL air suling, 0,5 mL HCl 1 M dan 100 μL 2-nitrobenzaldehida (C7H5NO3) ke setiap tabung, kocok dengan benar selama 2 menit;
2) Inkubasi semalaman pada suhu 37°C (sekitar 16 jam) atau dalam penangas air pada suhu 56°C (2 jam).
3) Tambahkan 5mL 0,1M K2HPO4, 0,4mL 1M NaOH dan 6mL etil asetat ke masing-masing tabung dan kocok selama 30 detik.
4) Sentrifugasi pada suhu kamar (20-25°C) di atas 4000r/menit selama 10 menit (jika terjadi emulsifikasi atau lapisan etil asetat kurang dari 3ml, sentrifugasi sampel berulang kali dalam penangas air pada suhu 80°C selama 10 menit; atau meningkatkan kecepatan dan memperpanjang waktu sentrifugasi).
5) Pindahkan 3 mL lapisan etil asetat ke dalam tabung sentrifus baru dan evaporasi hingga kering dengan nitrogen atau udara pada suhu 50°C.
6) Larutkan residu kering dalam 2 mL n-heksana, tambahkan 1 mL larutan rekonstitusi encer, aduk rata selama 30 detik, sentrifus pada suhu kamar (20-25°C) dengan kecepatan 4000 r/menit atau lebih untuk 10 menit;menghilangkan fase n-heksana atas.(Jika emulsifikasi terjadi, hilangkan fase n-heksana bagian atas, inkubasi sampel dalam penangas air 70°C selama 10-20 menit, dan sentrifus berulang kali).
7) Ambil 50 µL lapisan bawah untuk dianalisis.
Faktor pengenceran sampel: 1

 

 

6. Prosedur ELISA

6.1 Deskripsi
1) Bawa semua reagen dan strip microwell ke suhu kamar (20-25°C) sebelum digunakan;
2) Kembalikan semua reagen ke suhu 2-8°C segera setelah digunakan;
3) Reproduksibilitas tes ELISA sangat tergantung pada konsistensi pencucian piring.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah kunci dari prosedur ELISA;
4) Selama inkubasi suhu konstan, semua sampel dan reagen harus terlindung dari cahaya, dan setiap pelat mikro harus disegel dengan film penutup.

6.2 Prosedur Operasi
1) Letakkan kit pada suhu kamar (20-25°C) selama minimal 30 menit, perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok dan dicampur dengan baik sebelum digunakan, dan masukkan strip microwell yang diperlukan ke dalam rangka pelat.Pelat mikro yang tidak digunakan harus ditutup kembali dan disimpan pada suhu 2-8°C, tidak dibekukan.
2) Persiapan larutan: 40 mL 20 × buffer pencuci pekat yang diencerkan 1:19 dengan air deionisasi (1 bagian 20 × buffer pencuci pekat + 19 bagian air deionisasi).Atau siapkan sesuai kebutuhan.
3) Penomoran: Beri nomor microwell sesuai dengan sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dibuat dalam rangkap dua dan posisinya dicatat.
4) Tambahkan 50µL sampel atau larutan standar untuk memisahkan sumur ulangan;tambahkan 50ul enzim konjugat ke masing-masing sumur, lalu tambahkan 50μL larutan kerja antibodi, dan kocok pelat dengan tangan agar tercampur dengan lembut.Tutup microplate dengan cover film dan inkubasi pada suhu 25°C selama 30 menit.
5) Tuang cairan ke dalam microwell, keringkan di atas kertas penyerap, tambahkan 250 µL/well buffer cuci untuk mencuci piring microwell selama 15-30 detik, kemudian angkat dan keringkan dengan kertas penyerap, ulangi 4-5 kali.(Jika ada gelembung udara setelah diketuk, potong dengan ujung yang bersih).
6) Pengembangan warna: Tambahkan 50 µL Substrat A ke masing-masing well, diikuti dengan 50 µL Substrat B. Campur perlahan dengan menggoyangkan plate dengan tangan, kemudian inkubasi dalam gelap pada suhu 25 °C selama 15 menit untuk mengembangkan warna.
7) Pengujian: Tambahkan 50 μL stop solution ke masing-masing sumur.Aduk perlahan dengan mengocok piring dengan tangan.Atur panjang gelombang pembaca pelat mikro ke 450 nm untuk menentukan nilai OD setiap sumur.(Disarankan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630nm dalam waktu 5 menit).

 

7. Keputusan hasil

 

Ada dua metode untuk menilai hasil: yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan konsentrasi AMOZ.

7.1 Penentuan kualitatif

Rentang konsentrasi (ng/mL) AMOZ dapat diperoleh dengan membandingkan nilai OD rata-rata sampel dengan larutan standar.Asumsikan nilai OD sampelⅠ adalah 0,3, dan sampelⅡ adalah 1,0, nilai OD larutan standar adalah: 2,243 untuk 0ppb, 1,816 untuk 0,03ppb, 1,415 untuk 0,09ppb, 0,74 untuk 0,27ppb, 0,313 untuk 0,81ppb .

7.2 Penentuan kuantitatif

Nilai rata-rata nilai absorbansi diperoleh untuk nilai rata-rata OD (B) sampel dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100%, yaitu ,

Persentase nilai absorbansi =	B	×100%
	B0

B—nilai OD rata-rata dari sampel atau larutan standar

B0—nilai OD rata-rata larutan standar 0 ng/mL

Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritma larutan standar AMOZ (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan sumbu X.Baca konsentrasi sampel yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran yang sesuai, akhirnya mendapatkan konsentrasi AMOZ dalam sampel.

 

8. Hal-hal yang perlu diperhatikan
1) Suhu ruangan lebih rendah dari 25 ℃ atau suhu reagen dan sampel belum kembali ke suhu kamar (20-25 ℃), yang akan menyebabkan nilai OD standar menurun.
2) Selama proses pencucian, pengeringan pelat mikro akan disertai dengan kurva standar yang tidak linier dan reproduktifitas yang tidak memuaskan;oleh karena itu, lanjutkan ke langkah berikutnya segera setelah dicuci.
3) Campur dengan baik, jika tidak akan ada reproduktifitas yang buruk.
4) Stop solution adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak dengan kulit.
5) Jangan gunakan kit setelah tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit dapat mengakibatkan perubahan sensitivitas dan nilai deteksi OD.Jangan mengganti reagen dari kumpulan kit yang berbeda.
6) Reseal microplates yang tidak terpakai dalam kantong self-sealing.Larutan standar dan skrup tidak berwarna sensitif terhadap cahaya dan tidak dapat langsung terkena cahaya.
7) Buang larutan pewarna yang warnanya menunjukkan bahwa larutan tersebut telah rusak.Nilai deteksi kurang dari 0,5 untuk larutan standar 1 (0 ppb) menunjukkan degradasi.
8) Suhu reaksi optimal adalah 25 ℃, dan sensitivitas deteksi dan nilai OD akan berubah jika suhunya terlalu tinggi atau terlalu rendah.
 

9. Masa penyimpanan dan masa berlaku
Penyimpanan: Simpan pada suhu 2-8°C, jangan dibekukan.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di kotak.
Catatan: Jika kemasan vakum microplate bocor, masih bisa digunakan tanpa mempengaruhi hasil tes, jadi Anda bisa menggunakannya dengan percaya diri.

 

 

Q1: Kapan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

 

Q2: Apakah ini mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifiknya harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

 

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami telah bersertifikat ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

 

Q4: Bagaimana cara menyediakan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan satu-satu melalui video, telepon, dll.

 

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

 

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga kirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.