Kit Uji Keamanan Makanan Nitrofuran SEM ELISA Untuk Sensitivitas Susu 0.02ppb 96Wells/Kit

Kit Uji Keamanan Makanan Nitrofuran SEM ELISA untuk Sensitivitas Susu 0.02ppb 96Wells/Kit

 

1. Prinsip Kit Uji Keamanan Pangan Nitrofuran SEM ELISA

 

Test kit ini didasarkan pada enzim immunoassay kompetitif untuk mendeteksi Nitrofuran (SEM) dalam sampel.Antigen kopling sudah dilapisi sebelumnya pada garis-garis sumur mikro.Nitrofuran (SEM) dalam sampel dan antigen kopling yang telah dilapisi sebelumnya pada strip sumur mikro bersaing untuk mendapatkan antibodi anti-SEM.Setelah penambahan enzim konjugat, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai optical density (OD) sampel memiliki korelasi negatif dengan SEM di dalamnya.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan konsentrasi SEM selanjutnya diperoleh.

 

2. Spesifikasi teknis

 

Sensitivitas: 0,02ppb

Suhu inkubasi: 25

Waktu inkubasi: 30 menit 15 menit

Batas deteksi Jaringan, telur, madu: 0.1ppb

Laju reaksi silang

SEM 100%

AMOZ < 0,1%

AOZ < 0,1%

AHD < 0,1%

Tingkat pemulihan

Jaringan 75±25%

Madu 70±20%

Telur 95±25%

 

3. Komponen Kit Uji Keamanan Pangan Nitrofuran SEM ELISA

 

1	Strip sumur mikro	12 strip dengan 8 yang dapat dilepas sumur masing-masing
2	6× larutan standar (masing-masing 1 mL)	0ppb	0,02ppb
		0,06ppb	0.18ppb
		0.54ppb	1.62ppb
3	Konjugasi enzim	7ml	topi merah
4	Solusi kerja antibodi	7ml	topi biru
5	Substrat A	7ml	topi putih
6	SubstratB	7ml	topi hitam
7	Hentikan solusi	7ml	topi kuning
8	20 × buffer pencuci terkonsentrasi	40ml	topi putih
9	2 × larutan pelarutan kembali pekat	50ml	topi transparan
10	2-Nitrobenzaldehida (C7H5NO3)	10ml	topi hitam

 

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

 

1) Peralatan: pembaca pelat mikro, printer, homogenizer, alat pengering nitrogen, vortex, centrifuge, pipet ukur, timbangan (sensibilitas timbal balik 0,01 g), inkubator, penangas air;

2) Mikropipettor: saluran tunggal 20-200µL, 100-1000µL, dan multi-saluran 30～300µl;

3) Reagen: NaOH, etil asetat, n-Heksana, HCI (sekitar 36,5%), K2HPO4·3H2O.

 

5. Sampel pra-perawatan

 

instruksi

Poin-poin berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan dari segala jenis sampel:

1) Hanya ujung sekali pakai yang dapat digunakan untuk eksperimen dan ujungnya harus diganti bila digunakan untuk menyerap reagen yang berbeda;

2) Sebelum melakukan percobaan, setiap peralatan percobaan harus dalam keadaan bersih dan bila perlu dibersihkan kembali agar tidak terjadi kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan larutan sebelum sampel pra-perawatan:

1) 0,1 M K2HPO4: larutkan 11,4 g K2HPO4·3H2O dalam air deionisasi hingga 500mL.

2) 1 M HCl: larutkan 8.6mL HCI (kira-kira 36.5%) dalam air deionisasi hingga 100mL.

3) NaOH 1 M: larutkan 4g NaOH dalam air deionisasi hingga 100mL.

4) larutan pelarutan kembali pekat 2x diencerkan dengan air deionisasi pada 1:1(larutan pelarutan kembali 1mL pekat + air deionisasi 1mL), digunakan untuk pelarutan kembali sampel.

 

5.1 Persiapan sampel

a) Tisu, telur

1) Timbang 1±0,05g sampel homogen, tambahkan 4mL air suling, 0,5mL 1 M HCI dan 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ke setiap tabung, kocok dengan benar selama 2 menit;.

2) Inkubasi pada suhu 37 semalaman (kira-kira 16 jam) atau inkubasi pada suhu 56 dengan penangas air (2 jam).

3) Tambahkan 5mL 0,1M K2HPO4, 0,4mL 1M NaOH dan 6mL etil asetat ke dalam masing-masing tabung, kocok selama 30 detik.

4) Centrifuge di atas 4000r/min pada suhu kamar (20-25 ) selama 10 menit (jika ada Emulsifikasi atau lapisan etil asetat tidak cukup untuk 3ml, inkubasi sampel pada penangas air 80℃ selama 10 menit dan sentrifugasi berulang kali; atau tingkatkan kecepatan dan memperpanjang waktu centrifuge).

5) Pindahkan 3mL lapisan etil asetat ke dalam tabung sentrifugal baru dan evaporasi sampai kering dengan nitrogen atau udara pada 50℃.

6) Larutkan residu kering dalam 2mL N-heksana, tambahkan 1mL larutan pelarutan kembali yang telah diencerkan, aduk rata selama 30 detik, sentrifus di atas 4000 r/menit pada suhu kamar (20-25 ) selama 10 menit;Hapus fase N-heksana lapisan atas (jika ada Emulsifikasi, setelah menghilangkan fase N-heksana lapisan atas, inkubasi sampel pada penangas air 70℃ selama 10-20 menit, sentrifugasi berulang kali).

7) Ambil 50 L bagian bawah untuk analisis.

Lipatan pengenceran sampel: 2

b) Sayang

1) Timbang 2±0,05g sampel homogen (madu), tambahkan 4mL air suling, 0,5mL 1 M HCI dan 100 L 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) ke setiap tabung, kocok dengan benar selama 2 menit;.

2) Inkubasi pada suhu 37 semalaman (kira-kira 16 jam) atau inkubasi pada suhu 56 dengan penangas air (2 jam).

3) Tambahkan 5mL 0,1M K2HPO4, 0,4mL 1M NaOH dan 6mL etil asetat ke dalam masing-masing tabung, kocok selama 30 detik.

4) Centrifuge di atas 4000r / menit pada suhu kamar (20-25 ) selama 10 menit (jika ada Emulsifikasi atau lapisan etil asetat tidak cukup untuk 3ml, inkubasi sampel pada penangas air 80 selama 10 menit dan sentrifugasi berulang kali; atau tingkatkan kecepatan dan memperpanjang waktu centrifuge).

5) Pindahkan 3 mL lapisan etil asetat ke dalam tabung sentrifugal baru dan evaporasi sampai kering dengan nitrogen atau udara pada 50 .

6) Larutkan residu kering dalam 2mL N-heksana, tambahkan 1mL larutan pelarutan kembali yang diencerkan, aduk rata selama 30 detik, sentrifus di atas 4000r/menit pada suhu kamar (20-25 ) selama 10 menit;Hapus fase N-heksana lapisan atas (jika ada Emulsifikasi, setelah menghilangkan fase N-heksana lapisan atas, inkubasi sampel pada penangas air 70℃ selama 10-20 menit, sentrifugasi berulang kali).

7) Ambil 50 L bagian bawah untuk analisis.

Lipatan pengenceran sampel: 1

 

6. Prosedur ELISA

 

6.1 Instruksi

1) Bawa semua reagen dan strip sumur mikro ke suhu kamar (20-25 ) sebelum digunakan;

2) Kembalikan semua reagen ke 2-8 segera setelah digunakan;

3) Reproduksibilitas analisis ELISA, sebagian besar, tergantung pada konsistensi pencucian piring.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah poin kunci dalam prosedur ELISA;

4) Untuk inkubasi pada suhu konstan, semua sampel dan reagen harus menghindari paparan cahaya, dan setiap lempeng mikro harus disegel oleh membran penutup.

 

6.2 Prosedur operasi

1) Letakkan kit pada suhu kamar (20-25°C) setidaknya selama 30 menit, perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok dan dicampur dengan baik sebelum digunakan, dan masukkan strip microwell yang diperlukan ke dalam bingkai pelat.Pelat mikro yang tidak digunakan harus disegel kembali dan disimpan pada suhu 2-8°C, tidak dibekukan.

2) Persiapan larutan: Ambil 40 mL 20x buffer pencuci pekat dan encerkan dengan air deionisasi pada 1:19 (1 bagian dari 20x buffer pencuci pekat + 19 bagian air deionisasi).Atau siapkan sesuai kebutuhan.

3) Penomoran: Beri nomor sumur mikro sesuai dengan sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dibuat rangkap dua, dan posisinya harus dicatat.

4) Tambahkan 50µL sampel atau larutan standar ke sumur duplikat;tambahkan 50ul enzim konjugat ke masing-masing sumur, lalu tambahkan 50µL larutan kerja antibodi, dan kocok piring agar tercampur perlahan.Tutup microplate dengan film penutup dan inkubasi pada 25 ° C selama 30 menit.

5) Tuang cairan ke dalam sumur mikro, keringkan di atas kertas penyerap, tambahkan 250 L/sumur buffer pencuci untuk mencuci pelat sumur mikro selama 15-30 detik, lalu keluarkan dan keringkan dengan kertas penyerap, ulangi 4-5 kali.(Jika ada gelembung udara setelah disadap, potong dengan ujung yang bersih).

6) Pengembangan warna: Tambahkan 50 L Substrat A dan 50 L Substrat B ke masing-masing sumur.Kocok piring dengan tangan untuk mencampur dengan lembut dan inkubasi pada 25 ° C selama 15 menit dalam gelap untuk pengembangan warna.

7) Assay: Tambahkan 50 L stop solution ke setiap sumur.Aduk perlahan dengan mengocok piring dengan tangan.Atur panjang gelombang pembaca lempeng mikro menjadi 450 nm untuk menentukan nilai OD masing-masing sumur.(Disarankan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630nm dalam waktu 5 menit).

 

7. Hasil penilaian

 

Ada dua metode untuk menilai hasil: yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel memiliki korelasi negatif dengan konten SEM.

7.1 Penentuan kualitatif

Rentang konsentrasi (ng/mL) dapat diperoleh dari membandingkan nilai OD rata-rata sampel dengan larutan standar.Dengan asumsi bahwa nilai OD sampelⅠ adalah 0,3, dan sampelⅡ adalah 1,0ppb, nilai OD larutan standar adalah: 2,243 untuk 0ppb, 1,816 untuk 0,02ppb, 1,415 untuk 0,06ppb, 0,74 untuk 0,18ppb, 0,313 untuk 0,54 ppb, 0,155 untuk 1,62ppb, maka rentang konsentrasi sampelⅠ adalah 0,54 hingga 1,62ppb, dan rentang konsentrasi sampelⅡ adalah 0,06 hingga 0,18ppb.

7.2 Penentuan kuantitatif

Nilai rata-rata nilai absorbansi diperoleh untuk nilai OD rata-rata (B) sampel dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100% yaitu ,

Persentase nilai absorbansi =	B	×100%
	B0

B—nilai OD rata-rata (sumur ganda) dari sampel atau larutan standar

B0—nilai OD rata-rata dari larutan standar 0ng/mL

Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritma larutan standar SEM (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan X.Baca konsentrasi sampel yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran yang sesuai, akhirnya diperoleh konsentrasi SEM dalam sampel.

 

8. Tindakan Pencegahan

 

1) Jika suhu kamar lebih rendah dari 25 atau suhu reagen dan sampel tidak kembali ke suhu kamar (20-25 ), nilai OD standar akan turun.

2) Selama proses pencucian, pengeringan pelat mikro akan disertai dengan kurva standar yang tidak linier, dan reproduktifitasnya tidak ideal;oleh karena itu, lanjutkan ke langkah berikutnya segera setelah mencuci.

3) Aduk rata, jika tidak, reproduktifitasnya akan buruk.

4) Solusi stop adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak kulit.

5) Jangan gunakan kit di luar masa simpan.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit dapat mengakibatkan perubahan nilai OD sensitivitas dan deteksi.Jangan mengganti reagen dalam batch kit yang berbeda.

6) Tutup kembali pelat mikro yang tidak digunakan dalam kantong ziplock.Larutan standar dan skrup tidak berwarna peka terhadap cahaya dan tidak dapat langsung terkena cahaya.

7) Buang larutan pewarna yang warnanya menunjukkan bahwa larutan tersebut telah terdegradasi.Nilai deteksi kurang dari 0,5 untuk Solusi Standar 1 (0 ppb) menunjukkan degradasi.

8) Suhu reaksi optimal adalah 25℃, dan sensitivitas deteksi dan nilai OD akan berubah jika suhu terlalu tinggi atau terlalu rendah.

 

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

 

Penyimpanan: Simpan pada suhu 2-8°C, jangan dibekukan.
Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di kotak.
Catatan: Jika kemasan vakum microplate bocor, itu masih dapat digunakan tanpa mempengaruhi hasil pengujian, sehingga Anda dapat menggunakannya dengan percaya diri.

 

Q1: Kapan akan dikirim?
A1: Kami akan mengirimkan barang untuk Anda sesegera mungkin dalam waktu 7 hari kerja setelah menerima pembayaran.(Dalam kasus faktor eksternal seperti epidemi, pengiriman mungkin tertunda)

 

Q2: Apakah mendukung OEM/ODM?
A2: Ini dapat didukung, tetapi jumlah spesifik harus lebih dari 100.000 buah, yang nyaman untuk produk yang disesuaikan.

 

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami memiliki sertifikasi ISO9001 dan ISO13485 secara nasional.Proses produksi kami sesuai dengan prosedur standar untuk memastikan kualitas produk yang optimal.

 

Q4: Bagaimana memberikan layanan purna jual?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Kami dapat memberi Anda panduan pribadi melalui video, telepon, dll.

 

Q5: Apa metode pembayarannya?
A5: Kami menerima pembayaran dengan T/T.

 

Q6: Bagaimana cara mengirim?
A6: Pilih metode pengiriman terbaik untuk Anda dengan mendapatkan penawaran dari banyak operator kooperatif kami, dan juga mengirimkan sesuai dengan kebutuhan Anda.