Kit Uji Susu ELISA Cepat Melamin Untuk Susu Deteksi 96Wells / Kit ISO9001

Melamine ELISA Test Kit untuk Deteksi Susu 96Wells/Kit ISO9001

 

1. Prinsip

Test kit ini didasarkan pada immunoassay enzim kompetitif tidak langsung untuk mendeteksi Melamin dalam sampel.Antigen kopling sudah dilapisi sebelumnya pada garis mikro-sumur.Melamin dalam sampel dan antigen kopling yang dilapisi sebelumnya pada garis sumur mikro bersaing untuk mendapatkan antibodi anti-Melamin.Setelah penambahan konjugat enzim, substrat TMB ditambahkan untuk pewarnaan.Nilai kerapatan optik (OD) dari sampel pengujian memiliki korelasi negatif dengan konsentrasi Melamin dalam sampel.Nilai ini dibandingkan dengan kurva standar dan konsentrasi Melamin kemudian diperoleh.

 

 

2.Alat Uji SusuKomponen

1	Strip sumur mikro	12 strip dengan 8 dilepas sumur masing-masing
2	6× larutan standar (masing-masing 1 mL)	0ppb	0,5ppb
		1,5ppb	4,5ppb
		13,5ppb	40,5ppb
3	Solusi standar spiking	1 ppm	1 ml
4	Konjugasi enzim	7ml	topi merah
5	Solusi kerja antibodi	7ml	topi biru
6	Substrat A	7ml	topi putih
7	SubstratB	7ml	topi hitam
8	Hentikan solusi	7ml	topi kuning
9	10x pengambilan sampel Sebuah solusi	50ml	topi transparan
10	20x sampel mengekstrak larutan B	50ml	topi biru
11	20x buffer pencuci pekat	15ml	topi putih

 

3. Spesifikasi teknis

Sensitivitas: 0,5ppb

Suhu inkubator: 25 ℃

Waktu inkubator: 30 menit～15 menit

Batas deteksi:

Mentega, permen, keju 10ppb

Laju reaksi silang:

Melamin 100%

Tingkat pemulihan:

Mentega 90±25%

Permen, keju 95±25%

 

4. Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan

1) Peralatan: pembaca microplate, printer, vortex, centrifuge, pipet ukur, keseimbangan (sensibilitas timbal balik 0,01 g), penangas air 70 ℃;

2) Mikropipet: saluran tunggal 20~200 µL, 100~1000 µL;dan multisaluran 30～300 μl;

 

5. Contoh pra-perawatan

Instruksi (Poin-poin berikut harus ditangani sebelum pra-perawatan)

1) Hanya tip sekali pakai yang dapat digunakan untuk percobaan dan tip harus diganti bila digunakan untuk reagen yang berbeda;

2) Sebelum percobaan, setiap peralatan percobaan harus dibersihkan dan bila perlu dibersihkan kembali, untuk menghindari kontaminasi yang mengganggu hasil percobaan.

Persiapan solusi

1) Sampel mengekstraksi larutan

Encerkan 10x ekstraksi sampel Larutan dengan air deionisasi pada 1:9;

2) Sampel mengekstraksi larutan B

Encerkan 20x sampel ekstraksi larutan B dengan air deionisasi pada 1:19.

 

5.1 Mentega

1) Ambil 1 g mentega segar ke dalam tabung sentrifus 50 ml, tambahkan 5 ml Larutan ekstraksi sampel A, inkubasi pada penangas air 70℃ selama 5 menit, vorteks dan kocok selama 5 menit, sentrifugasi di atas 4000 putaran/menit pada suhu kamar selama 5 menit;

2) Ambil cairan lapisan bawah 50ul untuk analisis

Lipat pengenceran sampel: 5

5.2 Permen, keju

1) Ambil 1 g sampel segar ke dalam tabung sentrifus 50 ml, tambahkan 5 ml Larutan ekstraksi sampel B, inkubasi pada penangas air 70℃ selama 5 menit, vortex dan kocok selama 5 menit, sentrifugasi di atas 4000 putaran/menit pada suhu kamar selama 5 menit;

2) Ambil cairan lapisan bawah 50ul untuk analisis

Lipat pengenceran sampel: 5

 

6. Prosedur ELISA

6.1 Instruksi

1 Bawa semua reagen dan strip sumur mikro ke suhu kamar (20-25 ℃).

2 Kembalikan semua reagen ke 2-8 ℃ segera setelah digunakan.

3 Reproduksibilitas analisis ELISA, sebagian besar, bergantung pada konsistensi pencucian pelat.Pengoperasian pencucian piring yang benar adalah titik kunci dalam prosedur ELISA.

4 Untuk inkubasi pada suhu konstan, semua sampel dan reagen harus menghindari paparan cahaya, dan setiap pelat mikro harus disegel oleh membran penutup.

6.2 Prosedur operasi

1)Bawa test kit ke suhu kamar (20-25 ℃) selama minimal 30 menit, perhatikan bahwa setiap reagen harus dikocok secara merata sebelum digunakan;masukkan strip mikro-sumur yang diperlukan ke dalam rangka pelat.Tutup kembali pelat mikro yang tidak terpakai, disimpan pada suhu 2-8 ℃, tidak dibekukan.

2)Persiapan larutan: encerkan 15 mL buffer pencuci pekat 20X dengan air deionisasi hingga 300 mL untuk digunakan;

3)Penomoran: beri nomor sumur mikro menurut sampel dan larutan standar;setiap sampel dan larutan standar harus dilakukan dalam rangkap dua;mencatat posisi mereka.

4)Tambahkan 50µL sampel/larutan standar untuk memisahkan sumur duplikat, lalu tambahkan 50µL konjugat enzim, lalu tambahkan 50µL larutan kerja antibodi ke masing-masing sumur, kocok dengan benar, tutup pelat mikro dengan membran penutup, dan inkubasi pada suhu 25℃ selama 30 menit;

5)Tuang cairan keluar dari sumur, cuci pelat mikro dengan bufer pencuci yang telah diencerkan pada 250 µL/sumur sebanyak 5-6 kali.Setiap kali rendam sumur dengan buffer pencuci yang diencerkan selama 15-30 detik dan kemudian tutup hingga kering di atas kertas penyerap (jika ada gelembung setelah mengepak, potong dengan ujung yang bersih).

6)Pewarnaan: tambahkan 50µL substrat A, kemudian 50 µL substrat B ke dalam masing-masing lubang.Campur perlahan dengan mengocok piring secara manual, dan inkubasi pada 25 ℃ selama 15 menit dalam gelap untuk pewarnaan;

7)Penentuan: tambahkan 50µL stop solution ke dalam masing-masing sumur.Aduk perlahan dengan mengocok piring secara manual.Atur panjang gelombang pembaca pelat mikro pada 450 nm untuk menentukan nilai OD setiap sumur.(Disarankan untuk membaca nilai OD pada panjang gelombang ganda 450/630nm dalam waktu 5 menit).

 

7. Keputusan hasil

Ada dua metode untuk menilai hasil;yang pertama adalah penilaian kasar, sedangkan yang kedua adalah penentuan kuantitatif.Perhatikan bahwa nilai OD sampel berkorelasi negatif dengan kandungan Melamine.

7.1 Penentuan kualitatif

Rentang konsentrasi (ng/mL) dapat diperoleh dengan membandingkan rata-rata nilai OD sampel uji dengan larutan standar.Asumsikan nilai OD sampelⅠ adalah 0,3, dan sampelⅡ adalah 1,0, nilai OD larutan standar adalah: 2,043 untuk 0ppb, 1,604 untuk 0,5ppb, 1,101 untuk 1,5ppb, 0,512 untuk 4,5ppb, 0,161 untuk 13,5ppb , 0,055 untuk 40,5ppb, dengan demikian kisaran konsentrasi sampelⅠ adalah 4,5 hingga 13,5ppb, dan sampel Ⅱ adalah 1,5 hingga 4,5ppb.

7.2 Penentuan kuantitatif

Nilai rata-rata nilai absorbansi setara dengan persentase rata-rata nilai OD (B) sampel uji dan larutan standar dibagi dengan nilai OD (B0) larutan standar pertama (0 standar) dan selanjutnya dikalikan 100 %, itu adalah

 

Persentase nilai absorbansi =	B	×100%
	B0

 

B—rata-rata (sumur ganda) nilai OD dari sampel pengujian atau larutan standar

B0—nilai OD rata-rata larutan standar 0ng/mL

Gambarkan kurva standar dengan persentase penyerapan larutan standar dan nilai semilogaritmik dari larutan standar Melamin (ng/mL) masing-masing sebagai sumbu Y dan sumbu X.Baca konsentrasi sampel pengujian yang sesuai dari kurva standar dengan memasukkan persentase penyerapannya ke dalam kurva standar.Nilai yang dihasilkan selanjutnya dikalikan dengan lipatan pengenceran yang sesuai, akhirnya diperoleh konsentrasi Melamin dalam sampel.

 

8. Tindakan pencegahan

1)Suhu ruangan di bawah 25 ℃ atau suhu reagen dan sampel pengujian yang tidak dikembalikan ke suhu kamar (20-25 ℃) akan menyebabkan nilai OD standar yang lebih rendah.

2)Kekeringan pelat mikro dalam proses pencucian akan disertai dengan situasi termasuk kurva standar non-linier dan reproduktifitas yang tidak diinginkan;Jadi lanjutkan ke langkah selanjutnya segera setelah dicuci.

3)Campur secara merata, jika tidak akan ada reproduktifitas yang tidak diinginkan.

4)Solusi berhenti adalah larutan asam sulfat 2 M, hindari kontak dengan kulit.

5)Jangan gunakan kit melebihi tanggal kedaluwarsa.Penggunaan reagen yang diencerkan atau dipalsukan dari kit akan menyebabkan perubahan sensitivitas dan nilai OD pendeteksian.Jangan menukar reagen dari kit dengan nomor lot berbeda untuk digunakan.

6)Masukkan pelat mikro yang tidak terpakai ke dalam kantong penyegelan otomatis untuk menyegelnya kembali.Zat standar dan pembentuk warna tidak berwarna peka terhadap cahaya, sehingga tidak dapat langsung terkena cahaya.

7)Buang larutan pewarnaan dengan warna apa pun yang menunjukkan degenerasi larutan ini.Nilai pendeteksian larutan standar 1(0 ppb) kurang dari 0,5 menunjukkan degenerasinya.

8)Suhu reaksi optimal adalah 25 ℃, dan suhu yang terlalu tinggi atau rendah akan menyebabkan perubahan dalam sensitivitas pendeteksian dan nilai OD.

 

9. Penyimpanan dan tanggal kedaluwarsa

Penyimpanan: disimpan pada 2-8 ℃, tidak beku.

Tanggal kedaluwarsa: 12 bulan;tanggal produksi ada di box

Catatan: Jika paket Vakum microplate mengalami kebocoran, masih berlaku untuk digunakan, tidak mempengaruhi hasil tes, santai saja untuk digunakan.

 

 

Q1: Berapa lama waktu yang dibutuhkan untuk mengirim?
A1: Biasanya dikirim dalam 7 hari kerja.

 

Q2: Apakah Anda mendukung OEM/ODM?
A2: dapat didukung.Kami dapat menyesuaikan sesuai dengan kebutuhan spesifik Anda dan jumlah tertentu.

 

Q3: Bagaimana kinerja pabrik Anda dalam hal kontrol kualitas?
A3: Kami memiliki sertifikasi ISO9001 dan sertifikasi ISO13485, sejauh ini semua proses produksi, kami memiliki aturan standar, kami mematuhi perilaku dan hukum pemerintah yang relevan.

 

Q4: Apakah layanan purna jual dijamin?
A4: Kami menyediakan layanan purna jual teknis online profesional.Jika produk gagal selama percobaan, kami dapat menyediakan
bimbingan satu-ke-satu melalui telepon, video dan bentuk lainnya.

 

Q5: Berapa jumlah pesanan minimum Anda?
A5: 1Kit.

 

Q6: Apa metode pengirimannya?
A6: Dapat dikirim dengan pos kilat (FEDEX, UPS, DHL, EMS, dll.) atau melalui udara dan darat. Harap konfirmasi dengan kami sebelum melakukan pemesanan.